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2020版藥典一部 地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析
更新時間:2021-04-19   點擊次數(shù):5504次

客戶向我們提供了地黃苷D標(biāo)準(zhǔn)品溶液(液體)、地黃飲片和熟地黃(固體粉末)。希望本實驗室能夠按照2020版《中國藥典》中分析方法,篩選合適的色譜,使地黃飲片和熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度能夠達(dá)到基線分離,同時,地黃苷D峰的理論塔板數(shù)應(yīng)滿足藥典要求(不低于5000)。

 

我們按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法,對地黃飲片和熟地黃進(jìn)行了提取處理,然后按照藥典方法,

CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱上得到了良好的分析結(jié)果。

 

 
  

 

首先,下圖為使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色譜柱,對地黃苷D標(biāo)準(zhǔn)品的分析結(jié)果。

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:35°C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:客戶提供

進(jìn)樣量:10 µL

 

結(jié)果中,地黃苷D的保留時間為28.135 min,理論塔板數(shù)為13067,滿足藥典不低于5000的要求,峰不對稱因子為1.00,峰形良好。

 

隨后,我們使用同樣方法對熟地黃和地黃飲片的實際樣品進(jìn)行了分析,結(jié)果如下圖所示:

 

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:35 °C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:樣品按藥典方法處理

進(jìn)樣量:10 µL

 

地黃飲片中黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為1.52和1.88,熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為1.65和1.89,均可以得到基線分離。

然而從上面實際樣品的結(jié)果可以看到,地黃飲片樣品中地黃苷D與其前相鄰雜質(zhì)之間的分離度僅為1.52,剛剛達(dá)到基線分離,為了使其得到更好的分離,我們嘗試對柱溫進(jìn)行調(diào)整,分別在30℃和40℃對地黃飲片進(jìn)行分析,結(jié)果如下面兩張圖所示:

 

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:30°C / 40°C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:樣品按藥典方法處理

進(jìn)樣量:10 µL

 

在30℃柱溫下,地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為3.25和1.88,能夠得到良好的分離。在40℃柱溫下,地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為0.90和1.66,地黃苷D與其前雜質(zhì)未能達(dá)到基線分離,升溫不利于分離。

 

 

針對藥典中地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析,我們總結(jié)了以下注意事項:

(1). 由于中藥樣品中成分比較復(fù)雜,在不同色譜柱上的分離情況差異比較大,建議客戶在分析時,可根據(jù)具體分離情況,對有機(jī)相比例及柱溫進(jìn)行調(diào)整,以得到良好的分離。

(2). 地黃飲片及熟地黃中均含有疏水性較大的物質(zhì),我們進(jìn)行80min的洗脫后,仍可能有疏水性物質(zhì)未得到洗脫,建議客戶使用高有機(jī)相進(jìn)行沖洗。

 
 
  

 

綜上所述,使用CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱,按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法,能夠得到滿足藥典分離度和理論塔板數(shù)要求的分析結(jié)果。

 

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